三亿体育官方网站糖链的序列测定—高碘酸氧化法
高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处,生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行,每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量三亿体育官方网站,可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。
(1)溴甲酚蓝指示剂:0.1克溴甲酚蓝溶于250ml蒸馏水中(含1.43毫升0.1mol/L氢氧化钠)。
称取多糖样品25mg,用少量水溶解,加入30mmol/L高碘酸钠溶液,定容至25ml,置于暗处,室温下进行反应,于0,6,12,24,36,48…小时间隔取样0.1 ml, 蒸馏 水稀释250倍后,使用紫外 分光光度计 在223nm处测定光密度。至光密度值达一稳定值时,加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。由此光密度值根据标准曲线计算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反应溶液,测定甲酸的生成量。剩余部分进行Smith降解。
取2ml上述反应溶液,加一滴溴甲酚蓝作指示剂,用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定甲酸的释放量。
为避免发生超氧化,反应溶液的pH值应控制在3~5,而且一定要在低温、避光处进行
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