糖链的序列测定—高碘酸氧化法Smith降解法实验 生化分子 糖链的序列测定—高碘酸氧化法 (/experiment/15-1655-1.html) 高碘酸氧化和Smith降解 高碘酸可选择性断裂糖分子中的邻二羟基或邻三羟基处,生成相应的多糖醛,甲醛或甲酸.反应定量进行,每开裂1个C—C键消耗1分子高碘酸.通过测定高碘酸的消耗量及甲酸的释放量,可以判断糖苷键的位置,直链多糖的聚合度,分支多糖的分支数等.Smith降解是将高碘酸氧化产物还原后酸水解,再鉴定水解产物,从而推断糖苷键的位置与分支点等.以葡萄糖为例,以1—2或1 —4位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基消耗1分子高碘酸,且无甲酸释放;1—3位键合的糖基不被高碘酸氧化;1—6位键合的糖基或非还原末端糖基经高碘酸氧化,消耗2分子高碘酸同时释放1分子甲酸. 【实验原理】高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量，可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。【实验材料】1. 实验器材紫外分光光度计。2. 实验试剂(1)溴甲酚蓝指示剂:0.1克溴甲酚蓝溶于250ml蒸馏水中（含1.43毫升0.1mol/L氢氧化钠）。(2) 30mmol/L高碘酸钠溶液。高碘酸钠 基本信息 中文名称:高碘酸钠 英文名称:Sodium periodate 中文别名:过碘酸钠;偏高碘酸钠 英文别名:Sodium Metaperiodate; Sodium Metapriodate; Sodium (Meta)Periodate; Sodium Tetroxoiodate(Vii); Sodium meta periodate CAS:7790-28-5[1] EINECS:232-197-6 分子式:NaIO4 分子量:213.8918 高碘酸 简介 中文名称： 高碘酸 英文名称： periodic acid ??正高碘酸 英文别名:pentahydroxy-lambda~5~-iodane oxide[1] CAS No.： 10450-60-9 分子式： H5IO6 分子量： 227.94 理化特性： 主要成分： 纯品 外观与性状： 无色或白色结晶，无臭，有潮解性。 熔点()： 122 沸点()： 140(分解) 相对蒸气密度(空气=1)： 7.9 溶解性： 溶于水、乙醇，微溶于。 主要用途： 用作氧化剂。 高碘酸钠制备氯气氧化法 将碘在水介质中，通入氯气进行氧化生成高碘酸，经分离杂质后，加入氢氧化钠溶液中和至2～3，生成高碘酸钠溶液三亿体育官方网站，再经提纯、分离杂质、蒸发浓缩、冷却结晶、离心分离、干燥，制得高碘酸钠成品，其HIO4+NaOH→NaIO4+H2O (3) 乙二醇。(4) 0.01mol/L氢氧化钠溶液。【实验操作】1. 制作标准曲线支干燥试管，按下表操作 管号 0 1 2 3 4 5 高碘酸钠（ml） 0 0.5 1.0 1.5 2.0 4.0 蒸馏水（ml） 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 0 各取0.1 ml，定容至25 ml，在223nm处测定光密度 A223 ?横坐标为高碘酸钠毫摩尔数，纵坐标为光密度值，绘制标准曲线. 样品测定称取多糖样品25mg，用少量水溶解，加入30mmol/L高碘酸钠溶液,定容至25ml，置于暗处,室温下进行反应，于0，6，12，24，36，48…小时间隔取样0.1 ml，蒸馏水稀释250倍后，使用紫外分光光度计在223nm处测定光密度。至光密度值达一稳定值时，加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。由此光密度值根据标准曲线计算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反应溶液，测定甲酸的生成量。剩余部分进行Smith降解。3. 甲酸测定：取2ml上述反应溶液，加一滴溴甲酚蓝作指示剂，用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定甲酸的释放量。【注意事项】为避免发生超氧化，反应溶液的pH值应控制在3~5，而且一定要在低温、避光处进行实验 生化分子 糖链的序列测定—Smith降解法 (/experiment/15-1657-1.html) Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以12位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消…Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。以葡聚糖为例，其反应式如下图：以12位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith降解后产生甘油。以14位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith降解后产生赤藓醇。以13位键和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍为原来糖。以16位键和的糖基或非还原末端基（1）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸Smith降解后产生甘油。本实验通过纸层析检测终产物中的甘油、赤藓醇和糖。【实验材料】0.1mol/L醋酸。2mol/L硫酸。硼氢化钾。纸层析试剂及器材：除显色剂外，同实验二。硝酸银显色剂：A: 16%硝酸银水溶液: 丙酮为1：9（V/V）。B: 1%NaOH乙醇溶液(W/V)。C: 6mol/L氢氧化铵。【实验操作】1. 还原和水解高碘酸氧化后经乙二醇处理的溶液对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，于40以下减压浓缩至10ml左右，加入70mg硼氢化钾于室温、暗处搅拌18小时~24小时以还原多糖醛。用0.1 mol／L醋酸中和至pH6~7，对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，减压蒸干，加1 mol／L硫酸2ml，封管，100水解8小时，用碳酸钡粉末中和，定量滤纸过滤，滤液减压浓缩后，通过纸层析方法检测。2. 纸层析操作详见实验2（单糖组成分析）。展层后，将滤纸取出，自然干燥，喷上试剂A ，自然干燥，将滤纸浸入试剂B中，待斑点显出后，再浸入试剂C中以洗去滤纸上的氧化银，然后用水冲洗1小时左右，风干。以正丁醇：乙酸：水=4：l：5为展层剂时，甘油的Rf为：0.48，赤藓醇的Rf为：0.35。 2

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